溶液的光吸收率量測---以紅墨水為例
量測目的
*溶液的濃度越高，對光的吸收率越大。其原理就是利用該溶液對某些特定波長光線的吸收程度，推算光吸收率。
*舉例來說：要測量核酸（DNA or RNA）濃度時，可以依據該核酸樣品對320nm光波的吸收率來計算其濃度，通
常可以寫為A320或OD320。〝A〞即〝Absorbance（吸收率）〞；〝OD〞即〝optical density（光學密度）〞，吸收
率與光學密度相同。
*這裡以紅色墨水為實驗樣品，藉此讓使用者了解紅色溶液的吸收率。
準備物品
*光譜儀、USB、短光纖、鹵素燈、底座、試管座、方型試管、水、紅色墨水。
量測系統配置
*請將量測系統準備如下圖。
量測步驟
＜步驟一＞
先將盛水試管放入試管座，執行程式，出現如下圖畫面，接著請從主
選單中選擇【量測】，再進一步選擇【吸收量測】。
＜步驟二＞
選擇【吸收量測】之後，即開啟量測設定畫面，如下圖所示，並請依
指示從列表中選擇一台光譜儀做為光譜來源：
＜步驟三＞
為得到最佳量測效果，請先選擇【自動設置】，程式會自動將曝光時
間調整為最佳曝光時間（如下圖所示）。
選擇【自動設置】之說明：
因為在進行量測的時候，光源強度值
太強或太弱都會造成量測時的不確定
性增加。
若強度太強導致偵測訊號超出範圍
時，代表有部分數值已經無參考價
值；若強度太弱則可能因為跟系統背
景雜訊值太接近，而無法判讀數據，
所以建議調整積分時間使得光譜的最
高點落在45000 ~ 62000 counts之間。
＜步驟四＞
增加【平均次數】至【5】。
調整【平均次數】之說明：
為減低雜訊對量測的影響，在此以增
加平均次數的方式，降低雜訊。
＜步驟五＞
增加【平滑度】至【5】（如下圖所示）。
調整【平滑度】之說明：
為減低雜訊對量測的影響，在此以增
加平滑度的方式，降低雜訊。
＜步驟六＞
請點選
，將現在量測到的光源儲存為參考光譜。（如下圖所示）。
儲存參考光譜之目的：
此量測的分析原理是依據光源通過吸
收介質之後，光強度的衰減程度而
定。所以，為求得待分析物的光吸收
率，待分析物光譜須與一不含待分析
物的光譜相比，方能得知待分析物之
光吸收強度。不含待分析物的光譜即
為參考光譜。
＜步驟七＞
請先遮斷使用的光源，接著點選
以儲存暗光譜。（如下圖所示）。
暗光譜截取完畢之後，請按【完成】，即完成設定。
儲存暗光譜之目的：
為了扣除環境背景值，需在無光源的
環境之下取得環境背景值。
備註:
可直接使用鹵素燈光源的上面的活動
遮板進行遮斷光源的動作。
（如下圖所示）
＜步驟八＞
將紅墨水酌量滴入試管中，即可觀察紅墨水的光吸收率，如下圖所示：
因為待測物為紅色墨水，所以從吸收光譜圖上面可看到，400 nm ~ 600
nm的光線被紅色墨水所吸收；而600nm之後的波段則無明顯變化，代
表此區間的光線穿透出來。
備註說明：吸收率量測所計算公式如下：
A
λ = - log10 ( Sλ - Dλ / Rλ - Dλ )
其中：
S
λ：待測物光譜在波長
λ的強度值。
D
λ：暗光譜在波長
λ的強度值。
R
λ：參考光譜在波長
λ的強度值。
